Prosigna
Prosigna — это диагностический тест, предназначенный для оценки риска рецидива при гормонально-зависимом раке молочной железы. В основе теста лежит оценка экспрессионного профиля 50 мРНК в опухолевых клеток. Данный профиль описан в литературе под названием PAM50 и может быть оценен различными молекулярно-биологическими методами (ОТ-ПЦР, ДНК-микрочипы). Диагностический тест Prosigna позволяет проводить оценку экспрессии мРНК методом молекулярных флуоресцентных штрихкодов, и является стандартизированным и автоматизированным методом исследования. Разработка системы Prosigna на основе молекулярного профиля PAM50 принадлежит компании NanoString Technologies. NanoString Technologies производит реактивы, оборудование и программное обеспечение для проведения исследования с помощью данного теста.
Содержание
История разработки
Название PAM50 дано молекулярному профилю в соответствии с биоинформатическим методом обработки Prediction Analysis for Microarrays (прогностический анализ для микрочипов, PAM), который используется для обработки данных и количеством генов, экспрессия которых оценивается в ходе анализа (50 мишеней). Первые версии диагностических тестов были представлены микрочипами и количественной ОТ-ПЦР в реальном времени.
Система Prosigna берёт за основу молекулярный профиль PAM50 и рассчитывает степени риска для пациента с учётом стадии опухоли. Весь процесс работы осуществляется в закрытой системе. Результатом исследования является отнесение опухоли к тому или иному подтипу и числовой индекс риска рецидива. Для оценки экспрессионного профиля используется методика молекулярных флуоресцентных штрихкодов. Всё необходимое для исследования поставляет компания NanoString Technologies, обладающая патентом на данную разработку. Система одобрена для использования в диагностических целях в Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов в США и сертифицирована на территории Европейского Союза.
Показания
Диагностическая система Prosigna предназначена для оценки риска рецидива гормонально-зависимого рака молочной железы в следующих случаях:
- Для оценки риска отдалённого рецидива в течение 10 лет у женщин в пост-менопаузе, при раке без вовлечения лимфатических узлов (стадия I—II), с целью принятия решения о назначении гормональной адъювантной терапии.
- Для оценки риска отдалённого рецидива в течение 10 лет у женщин в пост-менопаузе, при вовлечении 1-3 лимфатических узлов или более 4 лимфатических узлов (стадия II — IIIA) с целью принятия решения о назначении гормональной терапии (лечения такими препаратами как Тамоксифен).
Процесс работы
Для стандартизации результата необходимо следовать инструкции, это касается, прежде всего, выбора материала для проведения анализа. Для исследования используются только фрагменты ткани, зафиксированные в формалине и заключённые в парафин. Рекомендуется выбирать под микроскопом участки препарата, содержащие только опухолевые клетки и проводить микродиссекцию данного участка и использование его для работы, во избежание получение ложноположительного результата, связанного с попаданием в образец нормальной ткани.
Из полученного фрагмента опухоли проводится выделение РНК. Далее препарат РНК поступает на анализ с применением молекулярных флуорисцентных штрихкодов, включающий гибридизацию с зондами и автоматизированную пробоподготовку (удаление несвязавшихся зондов, загрузка материала в микрофлюидные каналы картриджа, связывание молекулярных комплексов в картридже и подготовка к считыванию путём ориентировки молекулярных комплексов в магнитном поле). После автоматизированной пробоподготовки препарат переносится в сканер, осуществляющий считывание молекулярного профиля, идентификацию и подсчёт мишеней, подготовку отчёт об исследовании.
Общее время от момента выделения РНК до получения результата не превышает двух рабочих дней.
Диагностическая значимость
Низкие показатели риска позволяют отказаться от назначения химиотерапии, то есть повысить качество жизни пациентки. Особенно значимо проведение данного теста при вовлечении 1-3 лимфатических узлов, поскольку раньше во всех подобных случаях принято было назначить химиотерапию, однако исследования значения профиля PAM50 показали, что в ряде случаев этого можно избежать.
Процедура автоматизированного анализа результатов включает не только собранные в ходе исследования данные об экспрессионном профиле, но и сведения о размере, опухоли и вовлечении лимфатических узлов. Результатом анализа является отнесение пациента к группе «низкого», «промежуточного» или «высокого» риска., а также отнесение опухоли к одному из подтипов: люминальный рак A, люминальный рак B, HER2-положительный рак или базальный рак.
Успешность лечения Тамоксифеном значительно выше при опухолях люминальных подтипов. Лечение пациенток с другими подтипами опухолей не приведёт к улучшению, напротив, возможно развитие токсических эффектов. С другой стороны, опухоли подтипа Her2+ хорошо отвечают на терапию антрациклинами. Такого эффекта не наблюдается у пациенток с базальным подтипом опухоли.